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목적 : 윤부 줄기세포 결핍으로 인한 각막의 혼탁 및 실명은 윤부줄기세포가 포함된 세포판의 이식으로 시력회복을 기대할 수 있다. 하지만 지금까지 정확한 윤부줄기세포 표지자가 밝혀지지 않았고, 비특이적 상피세포 양성 표지자를 사용하고 있다. LGR5 (Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5) 는 Wnt signaling의 target으로 최근 생쥐의 장, 위, 모낭 줄기 세포에서 발견되어 성체줄기세포 표지자로 사용되고 있다. 본 연구에서는 윤부줄기세포 표지자로 LGR5가 사용될 수 있는지 확인하고자 한다.
방법 : 각막이식 후 남은 윤부 조직을 형광면역 염색을 통하여 표지자의 발현을 확인하고 윤부 explant 배양을 시행한다. 배양 종료 후 세포를 분리하여 LGR5와 ABCG2 positive 세포비율을 유세포 분석기를 이용하여 분석하였다. Anti-LGR5와 ABCG2 microbeads를 이용하여 positive/negative cell을 분획하고 콜로니 형성능과 stemness 관련 표지자들의 발현을 확인하였다.
결과 : 각막중심부부터 윤부까지 형광면역염색 결과 윤부의 기저층에서 LGR5의 강한 발현을 확인하였고 줄기세포 양성 marker로 알려진 ABCG2와 함께 발현되는 것을 확인하여 새로운 표지자로서 가능성을 확인하였다. 윤부 explant 배양 후 세포 분석 결과, LGR5와 ABCG2 positive cell의 비율이 각각 5.30 ± 2.11 와 8.02 ± 3.42 % 로 상대적으로 낮은 비율의 LGR5 positive 세포 비율이 확인되었고 LGR5(+)에서 콜로니 형성능이 유의미적으로 높게 확인되었다. Microarray 분석 결과, microbead를 이용하여 분획된 LGR5 positive/negative cells의 stemness 관련 표지자들의 발현이 LGR5(+) 세포에서 유의미하게 증가된 것을 확인하였다.
결론 : 윤부조직에서 LGR5의 강한 발현을 확인하였고, 윤부 explant 배양에서 LGR5 positive 세포의 콜로니 형성능과 stemness가 기존의 알려진 ABCG2 positive 세포보다 더 증가되었다. LGR5가 특이적인 윤부 줄기세포 표지자로서 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
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