|
목적 : 중간엽 줄기 세포 (Mesenchymal stem cells, MSCs)는 조직 공학, 재생 및 유전자 요법과 같은 다양한 목적을 위한 유망 세포이다. 외안근으로부터 분리 된 MSC(MDSC)는 시험 관내에서 쉽게 확장 될 수 있으며 지방 생성, 연골 형성, 골 형성 및 심지어 신경 세포 및 근원 분화와 같은 다중 계통 분화를 유도할 수 있다. 이 연구는 갑상선안병증(TAO) 환자와 정상인의 MDSC를 분리하고 특성을 분석하고 비교하였다.
방법 : 정상 외안근은 외사시 수술과 갑상선안병증은 제한성 사시 교정술 중에 얻어졌다. 채취한 시료를 잘게 자른후 0.25%의 콜라게네이즈를 처리하여 37°C에서 1시간 후 Primary media (1:1 Ham’s F-10 medium and DMEM+20% FBS+1% P/S + 2.5ng/ml hFGF4+ 50μg/ml gentamicin)에 넣어 콜라겐 코팅이 된 배양 접시에 배양한다. 1, 2, 18, 24시간 간격으로 조직이 포함된 배양액을 옮겨준 뒤 최종 배양접시에서 24시간 후 배양액은 버리고 Enrichment media(1:1 Ham’s F-10 medium and DMEM+20% FBS+1% P/S+2.5ng/ml hFGF4)을 넣어 약7~10일 배양한다. CD31, CD34 CD45, CD73, CD90, CD44 및 CD59와 같은 CD 표면 항원은 FACS(유동 세포 계측) 분석을, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL17A, TNF-α, IFN- γ, GM-CSF은 다중 분석 ELISA array kit를 이용하였다. Adipogenesis에는 Oil Red O 염색, osteogenesis에는 Alzarin Red, chondrogenesis에는 Alcian blue, 그리고 myogenesis에 대한 mRNA 수준을 측정하기 위한 realtime PCR을 수행했다.
결과 : MDSC의 CD표면 항원 및 사이토카인의 분비 측면에서 유사한 양상을 보였고, 지방 세포, 골 세포 및 연골 세포와 같은 다 분화능에서도 정상 및 TAO 환자 MDSC의 유의한 차이가 없었다. 그러나, 정상인 MDSC의 근육세포 분화능은 TAO 환자에서보다 높았다.
결론 : 갑상선안병증 환자 또는 정상인으로부터 유래 된 MDSCs는 서로 유사한 성질을 나타내었고 다양한 분야의 재생 및 난치질환 치료를 위한 줄기 세포 치료법의 좋은 후보로 사료된다.
|