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목적 : TCGA 보고에 따르면 맥락막흑색종의 50%에서 GNAQ gain-of-function 변이를 가지고 있으며, 이는 전사를 조절하는 YAP/TAZ의 활성을 항진시켜 흑생종 발생을 촉발한다. 이러한 YAP/TAZ의 주요 조절인자는 Hippo pathway로 알려져 있으며, 이는 YAP/TAZ의 negative regulator로 치료타겟으로 부적절하다. 이에 본 연구에서는 YAP/TAZ의 조절인자를 찾고 맥락막흑색종의 치료타겟을 발굴하고자 하였다.
방법 : Hippo pathway에 대한 간섭을 배제하기 위해 CRISPR/Cas9 system을 이용하여 LATS1/2 double knockout cell을 만들고, 이를 이용하여 18,000여개 유전자에 대한 Genome-wide RNAi screening 을 수행하였다. 발굴된 YAP 활성조절인자 (positive regulator)에 대한 기전 연구를 위해 Immunoblotting, Immunofluorescence study 등을 이용하였고, tumor xenograft model 을 통해 in vivo에서의 효과를 확인하고자 하였다.
결과 : LATS1/2 double knockout cell을 이용한 whole genome library screening을 통해 약 70여개의 Hippo-independent YAP/TAZ positive regulator를 발굴하였다. 이들은 대부분 Retrograde-vesicle-mediated transport, Mitotic nuclear division, 또는 rRNA processing에 관여하는 단백질이었다. 발굴된 타겟을 knockdown 하였을 때 YAP/TAZ의 활성 저하되는 것을 RT-PCR, Western blotting을 통해 확인하였으며, in vivo xenograft model에서 역시 uveal melanoma의 성장을 저해함을 확인하였다.
결론 : Whole genome screening을 통해 맥락막 흑생종의 성장을 조절할 수 있는 positive regulator를 발굴하였으며, 이들의 활성을 억제하여 맥락막흑색종의 치료가 가능할 것으로 생각된다.
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