| CO F-040 |
| Genetic engineering strategy to improve cell viability and corneal endothelial marker expression by the transfection of human corneal endothelial cells with ribonuclease 5 expression plasmid |
| Department of Ophthalmology, Seoul National University Hospital1, Cheil Eye Research Institute, Cheil Eye Hospital2, Chung-Ang University3 |
| Kyoung Woo Kim, Soo Jin Lee, Jae Chan Kim |
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목적 : 과거 안지오제닌 (Angiogenin)이라고 불린 리보핵산분해효소 5 (Ribonuclease 5, 이하 RNase 5)는 세포 내에서 핵 내 전위를 통해 신경퇴행성 질환 및 각종 세포의 스트레스 상황에서 세포 보호 및 생존 효과를 가진다고 알려져 각광받고 있는 물질이다. 본 연구에서는 리보핵산분해효소 5를 고발현하는 배양 사람 각막내피세포를 제작하여 이들의 생존능, 증식능 및 각막내피 고유 표현형 마커 발현을 분석하였다.
방법 : 사람 각막내피세포를 기증 각막에서 분리, 배양한 후 RNase 5 플라스미드 벡터를 형질 주입 (transfection)하여 RNase 5-고발현 사람 각막내피세포를 제작하였다. 이들의 세포 생존능을 MTT 분석법으로 평가하였으며 배양 기간 동안 성장 속도를 대조군 대비 비교 분석하였다. 나아가, RNase 5-고발현 사람 각막내피세포의 모양 및 Realtime PCR, Western blotting, 유세포 분석에 기반한 각막내피세포 마커들의 발현 양상을 바탕으로 각막내피세포의 형질 특성을 평가하였다.
결과 : RNase 5의 발현 증폭 후 각막내피세포의 생존능 및 성장 속도가 유의하게 향상되었으며 관련 후보 타겟 인자로서 programmed cell death protein (PDCD) 4가 억제되었고 cyclin D1과 cyclin E1이 활성화되었다. RNase 5-고발현 각막내피세포에서 대조군 대비 ATPase Na+/K+ transporting subunit alpha 1 (ATP1A1), tight junction protein 1 (TJP1), activated leukocyte cell adhesion molecule (ALCAM) 등의 각막내피 표현형 유전자 발현과 세포막에서의 Na+/K+ ATPase 단백 발현이 보다 뚜렷하였다.
결론 : 각막내피세포 내 플리스미드 형질 주입 기법을 통해 제작한 RNase 5-고발현 사람 각막내피세포는 세포 생존능과 각막내피 표현형이 발달되어 있기 때문에 향후 이를 이용한 세포 치료 연구에의 적용을 고려해볼 수 있겠다.
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