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목적 : MicroRNA (이하 miRNA)는 대략 22개의 nucleotide로 구성된 작은 RNA 분자로서 RNA silencing과 RNA 전사 후 유전자 발현을 조절한다고 알려져 있다. 본 연구팀은 리보핵산분해효소 5 (Ribonuclease 5, 이하 RNase 5)를 고발현하도록 제작한 배양 사람 각막내피세포에서 생존능과 세포 표현형이 개선된 기 연구 결과를 밝힌 바 있으며 이들 세포에서 각종 miRNA의 발현 양상을 분석하여 각막내피세포 내 RNase 5의 관련 작동 기전을 탐색하고자 하였다.
방법 : 배양 사람 각막내피세포에 0.2 μg과 0.5 μg의 두 가지 용량의 RNase 5 플라스미드 벡터를 형질 주입 (transfection)하여 RNase 5-고발현 각막내피세포를 제작하였다. 1차례 계대배양 직후로부터 72시간이 지난 다음 각종 miRNA들의 발현을 realtime PCR 기법으로 정량화하였으며 lipofectamine 단독 처리군 (mock 군), 0.2 μg과 0.5 μg의 두 가지 용량의 음성 대조군 벡터 (negative control [N/C] vector) 형질 주입군과 비교 분석하였다. 분석 대상으로 한 miRNA 중 세포 증식과 관련된 타겟으로는 miRNA-21, -23, -27a, -182를, 그리고 각막내피세포의 표현형과 관련된 타겟으로는 miRNA-378a-3p, -378c, -378f, -34a를 설정하였다.
결과 : Realtime PCR 분석 상 miRNA-23a, -27a, -378a-3p, -378f가 군간 유의한 발현 차이를 보였다. 특히, 0.5 μg RNase 5 벡터 형질 주입군에서 miRNA-23a, -27a의 발현이 mock 군과 음성 대조군 벡터 형질 주입군에 비해 유의하게 높았으며, 0.2 μg RNase 5 벡터 형질 주입군에서 miRNA-378f의 발현이 mock 군 대비 유의하게 높았다.
결론 : RNase 5-고발현 사람 각막내피세포의 증식능과 표현형 향상의 기전에 miRNA들의 발현 증가가 연관되어 있는 것으로 추정된다.
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