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목적 : 생체외 인간 각막내피세포 배양을 위하여 온도감응형 PNIPAAm 하이드로겔을 사용한 3차원적 세포배양술을 시행해보았으며, 그에 따른 세포 배양의 분열 효율과 기능적 적정성을 연구해보았다.
방법 : 각막이식술 시 채취한 기증각막의 윤부를 이용하여 인간 각막내피세포를 분리, 채취 후 절반은 저온 상태의 액화된 PNIPAAm 과 혼합하여 seeding 후, 37도에 보관하여 PNIPAAm이 탄성의 하이드로겔을 형성하도록 하였다. 그 후 medium을 넣어 세포가 분열하도록 유도한 후 세포의 증식 정도를 확인하였고, medium 에서 세포가 분비한 단백체들도 확인하였다. 나머지 윤부 기증각막은 기존에 알려져 있는 2차원적 부착 세포배양술을 시행 후 동일한 과정을 시행하였다.
결과 : PNIPAAm 하이드로겔을 이용한 각막내피세포 배양술은 기존의 술기보다 더 높은 세포생존능, 증식정도를 보였고, 각막내피세포 형태를 유지하고 있었다. 세포가 분비하는 단백체를 분석한 결과, 각막내피세포로서의 기능을 잘 유지하고 있음을 알 수 있었다.
결론 : 생체외 인간 각막내피세포 배양은 미래의 맞춤 재생 치료를 위하여 매우 중요한 술기이나, 2차원적 부착 세포배양술에 머물러 있어 실험의 효율과 세포 생존율이 다소 낮다. 온도감응형 하이드로젤인 PNIPAAm 을 이용하여 3차원적 세포 배양술을 하면, 보다 효율적이고 안정적인 인간 각막내피세포 배양을 시행할 수 있다.
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