| 외안F-047 |
| 액체 색층 분석 매스 분석법을 이용한 눈물 샘플의 단백질 프로파일 분석 |
| 연세대학교 의과대학 안과학교실 시기능개발 연구소(1)
연세대학교 의과대학 안과학교실 각막이상증 연구소(2)
경희대학교 응용과학대학 응용화학과 기능시스템생화학연구실(3) |
| 이철희(1), 최은영(1), 정재훈(3), 김광표(3), 김태임(1)(2), 서경률(1)(2), 김응권(1)(2), 이형근(1)(2) |
|
목적 : 눈물 샘플을 이용한 단백질 프로파일 분석을 통해 자연 상태 휴지기 눈물의 단백질 조성을 분석하고자 한다.
방법 : 정상안 14안으로부터 휴지기 눈물을 수집한 후 원심분리를 통해 딘벡질을 분리시켰다. 획득한 눈물 시료를 트립신을 이용하여 펩티드로 분해한 후 액체 색층 분석 매스 분석법(liquid chromatography mass spectrometry)을 통해 동정된 펩티드에 대한 분석을 진행하였다. 맥스퀀트(Maxquant) 데이터베이스를 이용하여 동정된 단백질에 대한 프로파일 분석을 진행하였고 생물학적 기능별로 동정된 단백질을 분류하여 정리하였다
결과 : 액체 색층 분석 매스 분석법 상 시간 별 다양한 높이의 피크들이 관찰되었으며 펩티드의 분리가 효과적으로 된 것을 확인하였다. 맥스퀀트 데이터베이스를 통해 동정된 단백질의 프로파일 분석 결과 320가지의 단백질이 확인되었다. (False discovery rate<0.01) 생물학적 기능 별로 단백질을 분류한 결과 상처에 대한 반응 및 회복에 관련된 단백질과 체액 조절에 관련된 단백질이 가장 큰 비중을 차지했다.
결론 : 본 연구를 통해 눈물 시료를 이용한 단백질 프로파일 분석이 가능함을 입증하였다. 또한 최근 출판된 연구들에서 평균적으로 80-200개 정도의 단백질을 동정하였다고 보고하고 있으나 본 연구에서는 그보다 많은 320개의 단백질을 동정하였다. 본 실험은 복잡한 펩티드 분해를 시행하지 않은 결과기 때문에 분획 후 분석이 진행이 되면 1000개 이상의 단백질을 동정할 것으로 예상된다. 이러한 데이터베이스 구축은 현재까지 분석이 어려웠던 자연상태 휴지기 눈물의 단백질 조성을 온전히 이해할 수 있게 되는 발판을 마련할 수 있을 것이다.
|
| |