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목적 : 망막색소상피세포의 증식과 이동은 망막전막, 연령관련황반변성, 당뇨병성망막병증의 견인막형성 그리고 증식유리체망막병증과 같은 다양한 망막질환의 병리에 주요한 역할을 한다. Small GTPase Rho는 망막상피세포의 증식과 이동을 조절하는 것으로 알려져 있고 이중 RhoG는 microRNA-124(miR-124)의 주요한 타깃 유전자로서 보고되고 있어 miR-124는 망막상피세포의 증식과 이동을 조절할 가능성이 있다.
방법 : MiR-124를 세포 내에 도입한 후 세포생존성과 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) 결합 정도를 정량적으로 측정하기 위해 WST-8과 BrdU에 대한 효소면역분석법을 시행하였고 miR-124를 세포 내에 과발현한 후 핵염색수에 대한 Ki-67의 발현비율을 계산하였다. 상처치유능과 세포이동을 miR-124와 miR-124 저해제의 작용하에 분석하였고 세포골격의 변화를 팔로이딘 염색을 통한 F액틴의 관찰을 통해 확인하였다. 세포증식과 상처치유능, 그리고 세포의 이동성 등을 RhoG siRNA를 이용한 RhoG녹다운을 시행하여 확인하였다.
결과 : MiR-124을 과발현한 후 망막색소상피세포의 세포생존능과 BrdU결합 정도, Ki-67발현/DAPI염색 비율은 유의하게 감소하였다. 상처치유와 세포이동성 또한 유의하게 감소하였고 miR-124의 세포 내 저해제에 의해서는 촉진되는 양상을 보였다. F액틴을 관찰하였을 때는 운동성을 나타내는 lamellipodia가 유의하게 형성 저해되는 것을 또한 관찰할 수 있었다. 표적유전자확인분석에서 miR-124과 luciferase 플라스미드의 동시도입은 RhoG 3’ 비번역영역결합 luciferase 활성도를 급격하게 감소시켰다. RhoG siRNA도입을 통한 RhoG의 녹다운은 miR-124 도입과 마찬가지로 세포생존능과 증식, 상처치유, 세포의 이동을 동일하게 감소시켰다.
결론 : MiR-124에 의한 RhoG의 하향조절은 세포생존능과 증식, 상처치유, 세포이동을 감소시킨다. 본 연구의 결과를 통해 miR-124가 망막색소상피세포의 다양한 생리학적 조절에 관여함을 확인할 수 있었다.
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