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목적 : 본 연구진은 기존 연구에서 안지오제닌을 이용하여 안압하강 효과 및 그 기전, 각막세포 내 면역조절효과 및 세포증식효과 등을 확인하였다. 녹내장 약제로 활용 가능한 후보물질로써의 안지오제닌의 기능을 재조명하기 위하여 추가적으로 신경줄기세포를 이용하여 안지오제닌에 의한 신경보호효과(neuroprotection)를 확인하고자 한다.
방법 : 신경줄기세포에 H2O2와 Glutamate를 처리한 후, MTT assay를 통해 50-60% 정도의 세포생존율을 보이는 적정 농도를 정한다. 기존 연구에서 좋은 효과를 보였던 농도의 안지오제닌(2ug/ml)을 전처리한 후 H2O2 와 Glutamate를 처리한 군과 H2O2와 Glutamate만 단독 처리한 군에서의 세포생존률의 차이를 MTT assay를 통해 확인한다. apoptosis 및 anti-apoptosis 기작을 확인하기 위하여 p21, p53, Bcl-2, Bax, cleaved caspase 3, cleaved caspase 9, cleaved PARP 등의 마커를 이용하여 western blot을 시행한다.
결과 : 배양액에 처리한 안지오제닌은 신경줄기세포의 핵 내로 이동하는 것이 관찰되었으며, H2O2와 Glutamate를 처리에 의해 50-60%로 떨어졌던 신경줄기세포 생존률은 안지오제닌 처리 후에 10-20% 정도 상승하는 것이 확인되었다. 또한 H2O2와 Glutamate를 처리에 의해 증가되었던 cleaved caspase 3, cleaved caspase 9, cleaved PARP 및 p21, p53, Bax가 안지오제닌을 전처리한 군에서 감소하는 양상을 나타내어 anti-apoptosis 효과가 확인되었다.
결론 : 안지오제닌에 의한 신경줄기세포의 생존률 증대 및 apoptosis 관련 인자 발현양상 분석을 통해 신경보호효과(neoroprotection)가 확인되었다.
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