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목적 : 각막의 투명성 유지에 가장 필수적인 각막 내피세포는 안구 표면 세포 중 유일하게 재생 불가능한 세포이다. 세포 주기가 중단되어 있어 재생 치료에 한계가 있는 사람 각막내피세포를 대상으로 안지오제닌을 이용하여 세포증식을 유도하고 그 기전을 밝힘으로써 외안부 질환 치료에 응용하고자 한다.
방법 : 각막조직의 면역형광염색을 통해 각막내피 내 안지오제닌의 발현양상을 확인하고, 배양된 각막내피세포에서 안지오제닌 처리에 따른 세포증식 효과를 MTT assay를 통해 확인한다. 또한 배양세포에 인위적인 상처를 유발한 후 안지오제닌 처리에 의한 세포이주능(migration assay)을 현미경을 통해 관찰한다. 안지오제닌의 세포증식효과기전을 분석하기 위해 세포증식관련 인자(Akt, Erk, eNOS)의 발현 및 인산화 양상을 western blot으로 측정한다. 기전을 재확인하기 위해 PI3K, Erk, NO 저해제 및 안지오제닌의 핵 내 이동 저해물질을 처리하여 안지오제닌의 세포이주능 효과 저해 여부를 확인한다.
결과 : 조직 내 각막내피세포에서 안지오제닌이 강하게 발현되었으며 세포질에 주로 분포하는 양상을 나타냈는데, 이는 안지오제닌 처리에 의해 핵 내로 이주하는 것이 관찰되었다. 또한 배양된 각막내피세포에서 안지오제닌에 의해 세포증식 및 세포이주능이 증진되는 양상을 확인하였으며, 세포증식 기전과 관련하여 Akt, eNOS, Erk 단백질의 인산화가 증가함을 확인하였다. 각 기전의 저해제를 안지오제닌과 동시처리해본 결과 PI3K/Akt/NO 및 Erk pathway와 안지오제닌의 핵 내 이동이 저해되었을 때 세포증식 및 이주능이 감소함이 확인되었으며, 그 중 PI3K가 저해되었을 때 그 효과가 가장 현저히 감소되었다.
결론 : 안지오제닌에 의한 각막내피세포의 세포증식 및 세포이주능 증진효과가 확인되었으며, 이 효과의 주요기전은 PI3K/Akt/NO pathway 인 것으로 사료된다.
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