| 목적 : Benzalkonium chloride (BAC)에 의해 유발되는 건성안 마우스에서 보존제 유무에 따른 Fluorometholone (FML)의 치료 효과를 비교하고자 하였다방법 : In vitro 실험에서, 배양된 결막 섬유아세포에 무보존제 FML과 0.01% BAC이 포함된 FML을 10분간 접촉 후, 6시간 동안 세포를 안정화시킨 뒤 CCK-8 kit를 이용하여 세포 독성을 비교하고 위상차 현미경을 통한 세포 형태 관찰을 시행하였다. In vivo 실험으로, 생쥐(C57BL/6)에 0.2% BAC을 5일간 하루 3회 (10AM, 4PM, 10PM) 점안하여 건성안을 유발하고 무보존제 FML과 0.01% BAC FML을 5일간 하루 4회 (8AM, 12PM, 4PM, 8PM) 점안하여 H&E를 통한 조직학적 분석, TUNEL assay를 통한 세포사 및 immunofluorescence stain 통한 염증관련 단백질의 발현 양상을 비교 함으로써 건성안에서 FML의 치료 효과를 분석하였다결과 : 위상차 현미경을 통한 세포 형태 관찰에서 0.01% BAC FML이 세포의 shrinkage, detachment 및 cell death가 관찰되었고, CCK-8을 이용한 세포 독성 비교에도 BAC을 포함한 FML이 무보존제 FML보다 시간 의존적으로 (3분, 5분, 10분 노출) 세포 독성이 강함을 나타내었다. H&E 염색을 통한 효과 분석에서 무보존제 FML의 경우 정상안과 유사하게 각막 표면은 매끄럽고, 층 형성이 규칙적이며, TUNEL-positive 세포의 수가 없거나 적은 반면, BAC이 포함된 FML의 경우 표면이 거칠고 각막의 두께가 얇아지며 TUNEL-positive 세포의 수가 증가하였다. 조직학적으로 무보존제 FML이 세포의 apoptosis나 염증 유발이 적게 나타났다.결론 : BAC이 포함된 FML은 결막 세포에 독성을 보이고 건성안 치료에도 무보존제 FML보다 염증을 유발하여 치료 효과가 떨어져 FML을 치료제로 사용할 경우 보존제 BAC의 독성을 고려해야 한다. |